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技术文章

家禽中激素含量的液相色谱仪测定

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一.仪器

  液相色谱仪,紫外检测器;离心机旋转蒸发仪;K-D浓缩器。

二.试剂

  激素标准贮备液:分别称取雌三醇、雌二醇、雌酮、睾酮、孕酮0.1000g,用甲醇溶解并定容至100mL,每毫升含各种激素均为1.000mg。

  激素标准使用液:精密吸取一定量的激素标准品和内标贮备液,用甲醇配制成每毫升含各种激素为10.00μg、an眠酮2.00μg和每毫升含各种激素2.00μg、an眠酮2.00μg的两种标准使用液。

三.实验步骤

  1.样品的处理

  取可食部分,捣成均浆,称取50g左右置250mL具塞三角瓶中。在上述样品中加入按眠酮20.00μg/mL的内标贮备液1.0mL,加甲醇+丙酮(1+1)混合溶液150mL,在振荡器上振摇提取30min。用快速滤纸过滤,残渣用少量甲醇+丙酮(1+1)混合液洗涤数次,洗液并入滤液中,于旋转蒸发仪或K-D浓缩器中将溶剂蒸除。残渣用甲醇20mL溶解,经盛有无水硫酸钠的漏斗滤入250mL分液漏斗中,再用10mL甲醇分数次洗涤漏斗及内容物,洗液并入滤液中,加pH=5.2的醋酸钠缓冲液80mL左右,混匀后二氯甲烷50mL、30mL、30mL振摇提取3次。合并提取液并用无水硫酸钠脱水,在水浴上挥干溶剂,残渣用甲醇溶解并定容至10.0mL,混匀后,以3000r/min速度离心5min,取上清液供色谱分析用。

  2.液相色谱参考条件 

  ① 色谱柱:HP-ODS 4.6mm×200mm。

  ② 流动相:乙腈+甲醇+四氢呋喃+0.01mol/L 醋酸钠溶液(20+20+10+50)。

  ③ 流速:1.0mL/min。

  ④ 测定波长:270nm。

  ⑤ 进样体积:10μL。

  3.样品测定

  取供色谱测定的样品溶液10μL,注入液相色谱仪,以内标法定量。

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