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技术文章

畜禽中土霉素、四环素、金霉素含量的液相色谱测定

技术文章

畜禽中土霉素、四环素、金霉素含量的测定

 

一.仪器

  液相色谱仪紫外检测器。

二.试剂

  土霉素标准溶液:称取0.0100g(±0.0001g)土霉素,用0.1mol/L盐酸溶液溶解,并定容至10.0mL ,即每毫升含土霉素1.0mg。

  四环素标准溶液:称取0.0100g四环素,用0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至10.0mL ,即此溶液每毫升含四环素1.0mg。

  金霉素标准溶液:称取0.0100g金霉素,用蒸馏水溶解并定容至10.0mL ,即此溶液每毫升含金霉素1.0mg。  

  混合标准溶液:取土霉素标准溶液、四环素标准溶液各1.0mL,金霉素标准溶液2.0mL置于10.0mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四霉素各0.1mg、金霉素0.2mg,临用时现配。

三.实验步骤

  1.样品处理

  称取5.00g(±0.01g)切碎的肉样(<5mm),置于50mL的锥形烧瓶中,加入5%高氯酸25.0mL于振荡器上振荡提取10min,移入离心管中,以2000r/min离心3min,取上清液经4.5μm滤膜过滤,以此液进行HPLC分析。

  2.液相分析参考条件  

  ① 色谱柱:ODS--C18(5μm),6.2mm×15cm。

  ② 流动相:乙腈+0.01mol/L磷酸二氢钠溶液[用30%(体积分数)硝酸溶液调节pH至2.5][35:65(体积比)]。

  ③ 流速:1mL/min。

  ④ 检测波长:355nm。

  ⑤ 进样量:10μL。

  3.样品测定  

  吸取四、1.处理好的溶液10 μL,注入液相色谱仪,进行HPLC分析,记录峰高,从工作曲线上查的含量。

  4.工作曲线的制备

  称取7分切碎的肉样,每份5.00g,分别加入混合标准溶液0μL,25μL,50μL,100μL,150μL,200μL,250μL,()()(含土霉素、四环素各为0.0μg,2.5μg,5.0μg,10.0μg,15.0μg,20μg,25μg,含金霉素0.0μg,5.0μg,10.0μg,20.0μg,30.0μg,40.0μg,50.0μg),与样品同样操作。以峰高为纵坐标,以抗生素含量为横坐标,绘制工作曲线

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