畜禽中土霉素、四环素、金霉素含量的液相色谱测定

畜禽中土霉素、四环素、金霉素含量的测定

一.仪器

  液相色谱仪，紫外检测器。

二.试剂

  土霉素标准溶液：称取0.0100g（±0.0001g）土霉素，用0.1mol/L盐酸溶液溶解，并定容至10.0mL ，即每毫升含土霉素1.0mg。

  四环素标准溶液：称取0.0100g四环素，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至10.0mL ，即此溶液每毫升含四环素1.0mg。

  金霉素标准溶液：称取0.0100g金霉素，用蒸馏水溶解并定容至10.0mL ，即此溶液每毫升含金霉素1.0mg。  

  混合标准溶液：取土霉素标准溶液、四环素标准溶液各1.0mL，取金霉素标准溶液2.0mL置于10.0mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四霉素各0.1mg、金霉素0.2mg，临用时现配。

三.实验步骤

  1.样品处理

  称取5.00g(±0.01g)切碎的肉样（＜5mm），置于50mL的锥形烧瓶中，加入5%高氯酸25.0mL于振荡器上振荡提取10min，移入离心管中，以2000r/min离心3min，取上清液经4.5μm滤膜过滤，以此液进行HPLC分析。

  2.液相分析参考条件  

  ① 色谱柱：ODS--C₁₈₍5_μm)，6.2mm×15cm。

  ② 流动相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氢钠溶液[用30%(体积分数)硝酸溶液调节pH至2.5][35:65(体积比)]。

  ③ 流速：1mL/min。

  ④ 检测波长：355nm。

  ⑤ 进样量：10μL。

  3.样品测定  

  吸取四、1.处理好的溶液10 μL，注入液相色谱仪，进行HPLC分析，记录峰高，从工作曲线上查的含量。

  4.工作曲线的制备

  称取7分切碎的肉样，每份5.00g，分别加入混合标准溶液0μL，25μL，50μL，100μL，150μL，200μL，250μL，（）（）（含土霉素、四环素各为0.0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，15.0μg，20μg，25μg，含金霉素0.0μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，30.0μg，40.0μg，50.0μg），与样品同样操作。以峰高为纵坐标，以抗生素含量为横坐标，绘制工作曲线