气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分

　　一、目的与要求

　　油脂是食品加工中重要的原料和辅料，也是食品的重要组分和营养成分。必需脂肪酸是维持人体生理活动的必要条件，人体所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。气相色谱法测定油脂脂肪酸组分是现在zui常用的方法，也是一些相关标准（如：GB/T17377）规定应用的检测方法。

　　甲酯化是分析动植物油脂脂肪酸成分的常用的前处理方法，也是常用的标准方法（GB/T 17376-1998）。

　　本实验要求了解气相色谱法测食用油脂肪酸组成的原理，掌握样品的前处理方法，学习食用油脂中脂肪酸组分的色谱分析技术。

　　二、原理

　　本实验甲酯化方法采用国标--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，释出的脂肪酸在3氟化硼存在下进行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于气象色谱分析。

　　样品中的脂肪酸（甘油酯）经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分，到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性，归一法确定不同脂肪酸的百分含量。

　　三、仪器与试剂

　　（一）仪器-

　　1．气相色谱仪：，配氢火焰离子化检测器（FID）。

　　2．恒温水浴锅

　　3．移液管

　　4．胶头滴管

　　5．小圆底烧瓶

　　6．冷凝管

　　7. 样品瓶

　　（二）试剂：.石油醚、已醚、氢氧化钾、甲醇均为AR级。

　　四、实验步骤

　　（一）样品预处理

　　酯化测定：

　　取0.2g油样于10ml容量瓶中，家5.0ml   4:3石油醚-已醚，使其溶解，在加4.0ml  0.5mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，振摇1分钟，放置8min后加水1.0ml，静止20min使之分层，取上层液注入色谱仪，保留时间定性，面积归一化法定量。

　　测定：

　　（1）气相色谱条件

　　①色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.32mm（内径）×30m，内膜厚度0.5um。

　　②程序升温： 150℃保持3min，5℃/min升温至220℃，保持10min；进样口温度250℃；检测器温度300℃。

　　③气体流速：氮气：40mL/min，氢气：40mL/min，空气：450mL/min，分流比30﹕1。

　　④柱前压：25kpa

　　（2）色谱分析

　　自动进样，吸取0.4-1μL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。利用标准图谱确定每个色谱峰的性质（定性），利用软件自带的自动积分方法计算各脂肪酸组分的百分含量。

　　五、鉴别

　　1.测定常见植物油主要脂肪酸的构成比并查阅有关资料，经统计学处理，不同的植物油主要脂肪酸的组成大部分有相同之处，但是主要脂肪酸的含量是不相同的。根据脂肪酸组成与含量，即可鉴别油品种类。

　　2.气相色谱法测定脂肪酸，通常用硫酸-甲醇法，和AOAC-IUPAC 标准法，我们采用了氢氧化钾-甲醇法，经试验3种方法测定结果差异无显著性。