液相色谱法测定食品中的激素含量

食品中激素含量的测定——液相色谱法：样品中的激素经提取分离后，以液相色谱仪分离测定。利用保留时间定性，峰高或峰面积与标准比较定量。

    测定方法步骤：

1 提取

    取可食用部分，捣成匀浆，称取50g左右，置于250mL具塞锥形瓶中。加入内标物an眠酮20.00μg/mL贮备液1.0mL，再加甲醇-丙 酮（1：1）混合液150mL，在振荡器上振荡提取30min，过滤，残渣用少量甲醇-丙酮（1：1）混合液洗涤数次，洗涤并入滤液中，于旋转蒸发器或K-D浓缩器中将溶剂蒸除。残渣用20mL甲醇溶解，经盛有无水硫酸钠的漏斗滤入250mL分液漏斗中，再用10mL甲醇分数次洗涤漏斗及内容物，洗液并入滤液中。加pH=5.2的醋酸钠缓冲溶液80mL左右，混匀后分三次用二氯甲烷（50mL、30mL、30mL）振摇提取，合并提取液，并用无水硫酸钠脱水，在水浴上挥干溶剂。残渣用甲醇溶解并定容至10.0mL，混匀后，以3000r/min速度离心5min，取上层清液供色谱分析用。

2 色谱条件：

    色谱柱4.6mm×200mm；流动相：乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.01mol/L醋酸钠溶液（20:20:10:50）；流速1.0ml/min；测定波长270nm；进样体积10μL。

3 测定

    取供色谱用的样品溶液10μL，注入液相色谱仪，以内标法定量。